产品货号:
ZN3202
中文名称:
培养细胞总蛋白提取液
英文名称:
Total protein extractant for cultured cells
产品规格:
30mL|100mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品用于从培养的哺乳动物细胞中高效提取总可溶性蛋白。这款完整的细胞裂解试剂是一种非变性除垢剂配方,可在30分钟内溶解细胞膜并提取总可溶性细胞蛋白。这种哺乳动物细胞裂解试剂可以不需要从培养皿上剥离贴壁细胞,可以简单而直接地在生长细胞的24孔和96孔板上进行裂解和分析。与很多下游分析都兼容,包括免疫分析、酶分析和各种常见的报告基因分析。使用本制品可在60分钟的时间内完成蛋白的提取。
组分 | 30mL | 100mL |
培养细胞总蛋白提取液 | 30mL | 100mL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:4℃
对于5×106个细胞的提取样品,100mL本制品可以提取20次。
- 蛋白酶和磷酸酶抑制剂
- 2mL离心管
- 能达到10000g的离心机
- 细胞刮
- 温和的除垢剂裂解,产生的提取物直接与BCA蛋白定量分析试剂或SDS-PAGE兼容。
- 提取的可溶性蛋白处于非变性状态,可直接用于免疫沉淀反应和其他亲和纯化过程。
- 可透析,确保其与随后的分析系统兼容。
- 贴壁细胞可直接在板上裂解。
- 本制品已在几种不同类型的细胞系上进行了测试,包括COS-7,NIH3T3,Hepa1-6,293T,CHO等细胞。
- 蛋白质提取效率通常比冻融法和超声波法高。
- 提取蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
取适当量的裂解液,放与4℃预冷,使用前数分钟内需加入酶抑制剂。
- 对于贴壁细胞:细胞刮刮下细胞,计数,并收集5×106个细胞,600g离心5分钟,尽量吸尽上清,用预冷的PBS重悬细胞,600g离心分钟收集细胞,尽量吸尽上清,加入0.5mL的预冷的裂解液,用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟,10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。
注意:可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞,具体操作如下:- 用移液枪小心吸去培养液,
- 加入适量的预冷的PBS,
- 用移液枪小心吸去PBS,
- 按照下表加入裂解液,4℃孵育30分钟。
- 将裂解液转入离心管中,10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。
- 用移液枪小心吸去培养液,
- 对于悬浮细胞:计数,并收集5×106个细胞,600g离心5分钟,尽量吸尽上清,用预冷的PBS重悬细胞,600g离心5分钟,尽量吸尽上清,加入0.5mL的预冷的裂解液,用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟,10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。
图1.细胞提取试剂提取不同细胞的蛋白,BCA测定蛋白浓度,上样20μg,跑胶,转膜,孵育一抗,使用发光显色液显影。
图2.依照本说明书操作,使用不同细胞得到的蛋白量。
问题 | 原因 | 解决方法 |
低蛋白的产出 | 蛋白表达低 | 转染步骤再优化 |
试剂量不足 | 加入更多试剂 | |
试剂不能渗透细胞膜 | 增加提取时间,在提取时摇动用力些 |
相关搜索:培养细胞总蛋白提取液,细胞总蛋白提取,Total protein extractant for cultured cells